ELISA（酶联免疫）的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

进行检测时，样品中的受检物质（抗原或抗体）与固定的抗体或抗原结合。通过洗板除去非结合物，再加入酶标记的抗原或抗体，此时，能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关。通过加入与酶反应的底物后显色，根据颜色的深浅可以判断样品中物质的含量，进行定性或定量的分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的灵敏度。

目前在体外诊断免疫学检验领域中，ELISA因其敏感性高、特异性强、重复性好，又因其使用试剂稳定、易保存而被广泛使用于抗原/抗体定量检测。

ELISA原理虽然是基于免疫学中抗体抗原的特异性结合，然而实际应用中，仍然需要根据抗体抗原的特性设计不同的检测法。除却双抗体夹心法和竞争法这两种最为广泛应用的检测法之外，还会介绍其他检测法。

夹心法

也称为“三明治”ELISA，可用来定量许多皮克到微克级别的物质（如激素，细胞信号化学物质，传染病抗原和细胞因子）。通常来说，双抗体夹心法用于检测较大分子的抗原，同理，双抗原也能检测大分子抗体。所谓的双抗体，第一个抗体则是包被在固相载体上的，通过特异性结合捕获抗原；而第二个抗体，也被称为标记抗体，带有酶标，通过催化底物进行显色，通过样本吸光度来鉴定抗原浓度。

图1：ELISA夹心法实验流程示意图

直接竞争法

此法一般适用于小分子或只有一个表位或重复表位的抗原。在包被抗体后将分为两组，a组加入酶标抗原和被检抗原，b组则只加入被检抗原。所谓竞争，则是在a组中，酶标抗原与被检抗原互相竞争和包被的抗体结合。最后通过底物显色得出两组之间的差值，便是被检抗原的浓度。  

图2：ELISA竞争法实验流程示意图

免疫抑制法

免疫抑制法虽然也是检测样本中特定抗原浓度，但它在固相载体上包被的是抗原而非抗体。如竞争法，包被后分为两组，a组加入参考抗体与被检抗原；被检抗原虽然会与抗体结合，但因为没有被固定在载体上，因此在洗涤阶段会被除去。通过加入抗体的酶结合物做显色测定，最后与B组的结果差值则为被检抗体含量。有趣的是，前两种方法都是显色程度越高，被检物含量越高，而免疫抑制法恰恰相反，测定组显色越低，说明被检抗原浓度越高。

图3：ELISA免疫抑制法实验流程示意图

直接法&间接法

直接法利用抗原结合在固定抗体商，再用酶连抗体直接与抗原结合，而后分解底物。

间接法是利用受检抗体与固相抗原结合后，再进行酶标做底物显色。

图4：ELISA直接法实验流程示意图

在开发ELISA相关试剂时，除却优化抗原或捕获抗体在固相材料上的包被条件以期最大限度地把有效蛋白包被到固相材料表面之外，还需要尽可能利用封闭剂将固相材料表面未占据的结合位点封闭以防止非特异性结合。

图5：未使用与使用封闭剂的抗原抗体结合情况比较

理想的封闭剂需具有：

 • 有效地阻断测定反应物非特异性结合到固体材料表面

 • 不影响已包被到固体材料表面的试剂有效成分

 • 可以起到试剂有效成分在固相表面稳定剂（防止变性）的作用

 • 不与其它试剂有效成分发生交叉反应

 • 不具有酶活性并由此可能与试剂中的底物反应而使信号加强或降解试剂中的反应物

 • 批间差异小

Sigma-Aldrich^®（现默克生命科学下属的子品牌，以下简称sigma）提供的高纯度冻干BSA均能满足以上要求。此款BSA来源于新西兰初级产业部(MPI)认证过的健康动物源血浆。通过利用独有的非溶剂型专利技术，将白蛋白从血浆蛋白和脂质中分离出来；分离过程包含改良的Cohn/热休克步骤，该处理专用于灭活蛋白酶和其他潜在的干扰酶；大量的膜透析和过滤等进一步处理步骤，可最大程度去除污染物，尤其是在敏感型体外诊断(IVD)测试中可能造成的背景干扰以及对敏感型细胞和细菌培养体系的抑制作用。

特性 / 优势

• 高纯度，低干扰，低背景

• 几乎没有可检测到的蛋白酶活性（确保检测可信性）

• 优良的溶解度/滤过率，方便使用

• 使用新西兰初级产业部(MPI)认证的牛血浆进行生产

• 经过朊病毒（传染性海绵状脑病(TSE)）去除验证

除却用于ELISA实验的封闭，我们的BSA还能够应用于：

• 蛋白质标准品，稀释剂

• 蛋白质，结合物或酶稳定剂

• 杂交

• 特定细胞培养应用

除了为ELISA分析开发商和制造商提供化学和生物原料之外，在我们的ISO 13485和FDA认证工厂内，我们还广泛代工生产IVD产品，包括ELISA和其他免疫分析。

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